ПЦР на коронавирус

Проверка методом ПЦР на наличие коронавируса позволяет с высокой точностью выявить инфицированных людей. Это высокоточное направление молекулярно-генетической диагностики, которое помогает обнаружить даже скрыто протекающую инфекцию. Перед выполнением тестирования требуется определенная подготовка для исключения ложноположительного или ложноотрицательного результата.

Особенности ПЦР-диагностики

С помощью ПЦР, или полимеразной цепной реакции, можно определить участки РНК, специфичные для возбудителей коронавирусной инфекции, в забранном у потенциального больного биоматериале. Это «золотой стандарт» биохимической диагностики любых патологий, спровоцированных не только вирусами, но и бактериями, грибками, простейшими. Методика основана на определении фрагментов РНК инфекционных возбудителей их многократным клонированием.

Одно из преимуществ ПЦР — обнаружение зараженных людей, у которых коронавирус не проявляется какими-либо симптомами. Проведение полимеразной цепной реакции позволяет выявить людей с латентным течением инфекции при малоинформативности вирусологических и серологических методов. Ее внедрение в клиническую практику сделало возможным быстрое тестирование зараженных коронавирусом (в течение одного-двух дней), даже если в их организме присутствуют мельчайшие фрагменты РНК патогенов.

Тестирование новорожденных

Группы особого риска — младенцы и дети до года. Как и пожилые люди, они подвержены риску тяжелого течения острых респираторных инфекций, включая коронавирусную. Это связано с тем, что после 65 лет функциональные системы защиты ослабевают, а у новорожденных они еще не сформировались. Среди детей отмечено мало случаев коронавируса, и пока не установлено достаточно его специфических признаков.

Но именно у новорожденных опасная патология может проявляться следующим образом:

• высокой температурой тела (выше 39,5°C);
• дыхательной недостаточностью в виде частого поверхностного дыхания, посинением носогубного треугольника;
• сильным кашлем, во время приступов которого у младенцев краснеет лицо, в тяжелых случаях — останавливается дыхание.

Опасен ли коронавирус для новорожденных? Несомненно, поэтому врачи незамедлительно приступают к лечению. Они могут дополнять терапевтические схемы препаратами для укрепления иммунной защиты малышей. Ведь у многих из них болезнь проходила очень тяжело: на грани дыхательной недостаточности и отказа внутренних органов из-за ослабленных легких.

В условиях пандемии первоочередной задачей становится диагностирование коронавирусной инфекции при первых ее симптомах. И ПЦР особенно хорошо справляется с этой задачей. Перед ее проведением не требуется забора крови у ослабленных детей — достаточно мазка из носоглотки.

Проверка новорожденных на коронавирус методом ПРЦ практикуется и в нашей стране, и за рубежом

Во время острого течения коронавируса у новорожденного ребенка высока вероятность обезвоживания. Причина — угнетение аппетита, рвота и водянистая диарея на фоне высокой температуры тела. При потере 10% жидкости организмом возможен летальный исход.

Как проводится ПЦР-тестирование

Полимеразная цепная реакция отличается повышенная чувствительностью и избирательностью. Это помогает обнаружить коронавирусы в очень малых концентрациях. С помощью ПЦР можно не только выявить патогены, но и идентифицировать их видовую принадлежность.

После забора у взрослого или ребенка биологического образца для анализа происходит его обработка. Чтобы выделить РНК коронавирусов, из материала удаляются белки, кровь, слизь. Для этого проба пропускается через сорбент, на поверхности которого оседают посторонние примеси. Затем выполняется промывание биообразца, центрифугирование, высушивание. В итоге остается осадок, после растворения которого получается очищенная РНК в жидкости — подвижной фазе, взаимодействующей с адсорбентом хроматографической колонки. Теперь в 2 этапа проводится непосредственно полимеразная цепная реакция.

Клонирование

Для ПЦР нужен амплификатор — специальный прибор-термостат, задачей которого является обеспечение периодического нагревания и охлаждения пробирок с полученным раствором. Для одной ПЦР-диагностики требуется около 30 циклов. Каждый из них включает денатурацию РНК, отжиг и элонгацию (этап биосинтеза молекул нуклеиновых кислот) матричной цепи. Для этого используется набор реактивов — праймеры, являющиеся синтетическими олигонуклеотидами, комплементарными концам искомого фрагмента, дезоксинуклеотидтрифосфаты, буферный раствор.

ПЦР-анализатор — специальное лабораторное оборудование, весьма востребованное во время пандемии коронавируса

В результате нагревания смеси и последующей денатурации цепи РНК коронавирусов расходятся, так как рвутся водородные связи между ними. А после постепенного снижения температуры с РНК связываются специфические праймеры. После 30 циклов даже из одного микроскопического фрагмента коронавируса получается огромное количество копий. Его более чем достаточно, чтобы обнаружить, идентифицировать инфекционного возбудителя, дать ему качественную и количественную оценку.

Электрофорез

На завершающей стадии клонирования в пробирке получается субстрат с многочисленными РНК коронавирусов (при условии, что патогены были в исследуемом образце). Он равномерно распределяется по лункам, внутри которых находится агарозный гель. После подключения анализатора к источнику тока запускается электрофорез, или электрокинетическое явление перемещения частиц дисперсной фазы. Нуклеиновые кислоты, подвергшиеся воздействию электрического тока, разделяются. Теперь их можно без труда рассмотреть в трансиллюминаторе. При ультрафиолетовом излучении они выглядят как светящиеся полоски оранжевого цвета.

Real-Time PCR

Помимо стандартной лабораторной ПЦР-диагностики во время пандемии широко применяется Real-Time PCR. Он не требует визуализации продуктов реакции с помощью электрофореза — их накопление фиксируется в реальном времени оптическими датчиками, вмонтированными в аппарат для клонирования РНК коронавирусов и настроенных на определенную длину волны, испускаемой флуоресцирующими метками.

Как правильно взять мазок на коронавирус

Real-Time PCR позволяет определять не только наличие нуклеотидной последовательности в биообразце, но и измерять количество копий матрицы. Для чего это нужно:

• можно сделать выводы о стадии и динамике коронавирусной инфекции;
• удается с высокой точностью оценить эффективность этиотропного лечения.

Происходит автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов. Real-Time PCR не нуждается в стадии электрофореза, что позволяет снизить требования, предъявляемые к ПЦР-лаборатории.

Забор биоматериала

Для проведения полимеразной цепной реакции можно использовать слюну, венозную кровь. Но основным видом биоматериала для тестирования на коронавирусную инфекцию является слизистый секрет, образующийся на стенках носоглотки. Забор в медицинских учреждениях выполняется средним медицинским персоналом или врачом следующим образом:

• правой рукой медработник берет пластиковый зонд с ватным тампоном;
• затем легким вращательным движением он вводит его в носовой ход или рот на глубину 1,5-2 сантиметра;
• не касаясь краев пробирки, зонд помещается в пробирку, которая находится во время забора в левой руке медработника.

В качестве биоматериала для проведения ПРЦ-диагностики на коронавирус используется преимущественно мазок из ротоглотки

После отламывания кончика зонда пробирку закупоривают и отправляют в контейнере-холодильнике в лабораторию для исследования. Чтобы его результаты были сразу максимально достоверными, нужно подготовиться:

• за сутки отказаться от кофе, алкоголя;
• не подвергать себя повышенным физическим нагрузкам;
• в день сдачи биоматериала не чистить зубы и не полоскать горло.

Необходимо не курить хотя бы за 30 минут до сдачи крови и согласовать использование или отмену лекарственных препаратов с лечащим врачом. Последнее условие особенно важно, так как прием препаратов с противомикробными, противовирусными или антибактериальными свойствами может исказить результаты ПРЦ-диагностики.

Расшифровка результатов

Тест на коронавирус преследует несколько целей, но основная — выявление в организме инфекционных возбудителей нового типа. Расшифровкой результатов занимаются специалисты лабораторий с высшим медицинским образованием. Они могут быть положительными или отрицательными. Последние указывают на отсутствие патогенов в биоматериале. А положительный результат свидетельствует о протекающем в организме инфекционно-воспалительном процессе.

Что может стать причиной ложноположительной реакции:

• неправильный сбор, хранение и транспортировка образцов;
• нарушение методики проведения полимеразной цепной реакции.

Ложноотрицательные результаты практически почти исключены. Крайне редко они могут быть получены из-за латентного течения инфекции в организме человека.

ВНИМАНИЕ! Проведение количественного ПРЦ-исследования обычно необходимо для подбора оптимальных доз препаратов, а также определения продолжительности терапевтического курса.

Где сдать анализ

Бесплатное ПРЦ-тестирование на наличие коронавирусов делают в государственных лабораториях и исключительно по направлению врача. Оно обязательно для людей из группы риска:

• вернувшихся из стран с неблагоприятной ситуацией по коронавирусу менее двух недель (максимальная длительность инкубационного периода);
• имевших близкие контакты в течение двух последних недель с людьми, которые заболели коронавирусной инфекцией;
• имеющих постоянные контакты с больными в процессе ухода.

Сколько делается анализ? В среднем он не занимает более суток. Но в период пандемии редко когда человек получает результаты ранее 3 дней.

Платно биоматериал можно сдать в специализированных лабораториях, аккредитованных Роспотребнадзором, оборудованных необходимой аппаратурой и тест-системами. Стоимость тестирования зависит от его вида (качественного или количественного), загруженности медицинского учреждения, цены используемых реактивов. Вызов сотрудников лаборатории на дом обойдется на порядок дороже. Стоит учесть, что проверится платно не получится при наличии симптомов какой-либо респираторной или кишечной инфекции.

ПЦР — качественный метод, направленный на выявление возбудителя вирусной инфекции COVID-19. Анализ предназначен для скринингового обследования пациентов. Его специфичность исключает возможность ложных результатов, так как перекрестная реакция антигенов невозможна. Поэтому именно с помощью ПРЦ выполняется тестирование пациентов из группы особого риска, включая новорожденных.