Анализ кала методом ПЦР

Время чтения: ~6 минут Автор: Любовь Добрецова 1615
Анализ кала методом ПЦР

Рolymerase Сhain Reaction (PCR), иначе полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это прогрессивный метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний обнаружения генетических патологий, выявления неопластических клеток в начальной стадии рака.

ПЦР относится к генно-молекулярным исследованиям, что обеспечивает высокую точность показателей, минимизирует риск ложноположительных результатов. Для анализа используется биологический материал – кровь, моча, мазок, экскременты, ликвор (спинномозговая жидкость).

Специфика исследования методом ПЦР

Анализ кала на ПЦР выявляет возбудителей инфекционных заболеваний и дифференцирует их разновидность на генно-молекулярном уровне. В ходе исследования оцениваются макромолекулы ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, простейших паразитов, глистов или РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов. Для идентификации достаточно небольшого фрагмента патогена, обнаруженного в экскрементах.

В задачи молекулярной диагностики входит:

  • обнаружение инфекционного агента;
  • идентификация разновидности микроорганизма (вирус, бактерия, простейший и т. д.);
  • дифференциация типа, рода, семейства и т. д.;
  • определение тактики лечения, в соответствии с диагностированным заболеванием.

Образец биоматериала помещают в реактор (амплификатор), добавляют реакционную смесь. При последовательной смене температурного режима разрываются водородные цепи дезоксирибонуклеиновой кислоты, образуются комплексы матрицы с праймерами – короткими генетическими фрагментами.

Реагенты достраивают матричную цепь и в ходе реакции амплификации формируют множественные копии возбудителя. При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю.

Макромолекулы РНК и ДНК являются носителями уникальной информации, характерной для определенного вида, поэтому точность результатов ПЦР-диагностики максимально приближена к 100%.

Спектр инфекций, определяемых методом PCR по образцу кала

Полимеразную цепную реакцию используют для диагностики кишечных бактериальных и вирусных инфекций, различных видов гельминтозов, заражения организма простейшими паразитами.

Неполный перечень возбудителей и болезней, определяемых методом ПЦР
Бактерии
Helicobacter pylori хеликобактер пилори язв желудка и двенадцатиперстной кишки, гастрит, дуоденит, рак желудка
Salmonella species сальмонелла сальмонеллез
Campylobacte кампилобактерия кампилобактериоз
Escherichia coli кишечная палочка (энтеротоксигенные штаммы) коли-инфекция
Shigella шигелла дизентерия
V. cholerae, Ber холерный вибрион холера
Yersinia pseudotuberculosis иерсиния псевдотуберкулез (кишечный иерсиниоз)
Вирусы
Rotavirus ротавирус ротавирусная инфекция
Adenovirus аденовирус кишечный грипп
Astrovirus астровирус астровирусная инфекция, гастроэнтерит
Norovirus норовирус норовирусная инфекция
Гельминты и простейшие паразиты
Giardia lamblia лямблии лямблиоз
Enterobius острицы энтеробиоз
Ascaris lumbricoides аскариды аскаридоз
Trichocephalus trichiurus власоглав трихоцефалез
Opisthorchis felineus и Opisthorchis viverrini описторхи (печеночные сосальщики) описторхоз
Taenia solium свиной цепень тениоз
Taenia saginata бычий цепень тениаринхоз
Echinococcus эхинококки эхинококкоз
Entamoeba histolytica амеба дизентерийная амебиаз

В большинстве случаев, анализ ПЦР кала назначают для выявления кишечных вирусов, бактерии хеликобактер пилори, лямблий и дизентерийных амеб. Определение глистной инвазии, как правило, проводят посредством обычного исследования экскрементов на яйца глистов. Бактериальные инфекции диагностируют с помощью анализа на дизгруппу.

Во многих клиниках существует стандартный ПЦР-скрининг на кишечные инфекции, вызванные бактериями и вирусами. Профиль включает определение восьми возбудителей (сальмонелла, шигелла, кампилобактерия, кишечная палочка, ротавирус, аденовирус, астровирус, норовирус).

Медицинские специалисты

ПЦР используют для уточнения спорных диагнозов, при получении ложноположительных и ложноотрицательных результатов других исследований. Анализ кала методом полимеразной цепной реакции могут назначить:

  • гастроэнтеролог (взрослый или детский);
  • инфекционист;
  • гепатолог;
  • педиатр;
  • терапевт.
  • проктолог;
  • онколог;
  • диетолог.

По желанию сдать анализ можно самостоятельно на возмездной основе в любом диагностическом центре Москвы и других городов РФ.

Ключевые достоинства PCR-диагностики

Метод полимеразной цепной реакции обладает значительными преимуществами, в сравнении с иными анализами:

  • Подлинность идентификации возбудителей. Определение генно-молекулярной структуры патогенного микроорганизма обеспечивает высокую точность результата.
  • Гиперчувствительность к инфекционным агентам. Для выявления патогена достаточно его молекулярного присутствия в образце кала.
  • Оперативность проведения анализа. Исследование в условиях лаборатории занимает 1-3 дня.
  • Комплексность. Одного образца кала достаточно для проведения анализа на несколько патогенных микроорганизмов.
  • Универсальность. С помощью Рolymerase Сhain Reaction возможно определить практически любых инфекционных агентов. Кроме того, анализ обнаруживает не только активные патогены, но и неактивные (погибшие под воздействием лекарственных препаратов).
  • Специфичность. В отличие от серологических методов, ПЦР не допускает перекрестных реакций иммуноглобулинов с близкородственными не комплементарными антигенами. Такая особенность исключает получение ложноположительных результатов анализа.
Важно! Проведение исследования методом ПЦР возможно только в специально оснащенных лабораториях при условии абсолютной стерильности и высокой профессиональной квалификации персонала. Присутствие любых посторонних ДНК в воздухе может повлиять на итоговые показатели анализа.

Ошибочные результаты PCR фиксируются при редком явлении генной мутации бактерий и вирусов.

Контейнеры для анализа кала
Варианты контейнеров для сбора кала на анализы

Подготовка к сдаче биоматериала на анализ

Стандартные правила подготовки перед сбором экскрементов для ПЦР-диагностики включают:

  • Отказ от приема любых медикаментов за 3-4 суток. Энтеросорбенты и антибиотики оказывают влияние на кишечную флору, слабительные лекарства – на моторику кишечника, препараты железа – на окрас экскрементов. Это может «смазать» картину итоговых результатов.
  • Устранение из меню продуктов, провоцирующих интенсивное газообразование (блюда из бобовых, капусту, сдобу и ржаной хлеб), за 2-3 дня.
  • Исключение ректальных суппозиториев и микроклизм.
  • Отказ от употребления спиртных напитков за 2-3 дня.

При назначенной рентгенографии желудка с использованием бария обследование нельзя проходить до сдачи образца кала. Грудным детям за 3-4 дня не рекомендуется вводить новый прикорм.

Сбор биоматериала на анализ

Сбор и транспортировка биоматериала на исследование методом полимеразной цепной реакции допускается только в стерильном контейнере, который необходимо заранее приобрести в аптеке. Аптечный контейнер имеет герметичную крышку и снабжен специальной ложечкой. Сдать образец кала в лабораторию необходимо утром. Максимальный интервал доставки составляет 3 часа.

При сборе кала следует придерживаться алгоритма:

  • Провести гигиену аноректальной зоны без использования мыла (геля).
  • Опорожнить мочевой пузырь.
  • Произвести дефекацию в судно (использовать бумагу или полиэтилен). Если собирать образец из унитаза, неизбежно попадание микробов.
  • Заполнить аптечную емкость на 1/3 часть фрагментами фекалий (для этого использовать ложечку).
  • Герметично закрыть крышку контейнера.
  • Оперативно доставить биологический материал в лабораторию медицинского учреждения.
Важно! Запрещается пить слабительные лекарства (в том числе, травяные сборы и БАДы) и проводить процедуру клизмирования. Образец для исследования должен быть получен естественным способом.

Если незамедлительная транспортировка кала к месту исследования невозможна, плотно закрытый контейнер нужно поместить в холодильнике не более, чем на 12 часов. Хранение экскрементов в морозильной камере или при комнатной температуре делает их непригодными к молекулярному исследованию.

ПЦР диагностика

При сборе каловых масс с подгузника грудного ребенка важно следить, чтобы в контейнер не попали фрагменты гигиенической ткани. Женщинам не рекомендуется собирать кал для ПЦР-диагностики в первую неделю фолликулярной фазы менструального цикла.

Возможные примеси менструальной крови помешают исследованию. При необходимости проведения экстренного анализа влагалище необходимо закрыть гигиеническим тампоном. Молекулярная диагностика чувствительна к попаданию любых примесей.

Во время процедуры сбора биоматериала нельзя касаться внутренней стороны емкости, ложечки и крышки. Реакция амплификации может создать копии ДНК, случайно попавшей с рук. Итоговые данные будут ложными.

Результаты анализа

В указанное время пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:

  • «обнаружено» или «положительно» - наличие инфекционного заболевания;
  • «не обнаружено» или «отрицательно» - отсутствие заражения.

Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации.

Кал на ПЦР
Пример бланка результатов молекулярного исследования кала

Итоги

ПЦР – один из самых информативных диагностических методов. Реакция амплификации базируется на определении ДНК и РНК возбудителей инфекционных заболеваний, что обеспечивает высокую точность результатов.

ПЦР анализ кала позволяет выявить вирусные и бактериальные кишечные инфекции, обнаружить инвазии простейших паразитов и гельминтов, а также на 100% идентифицировать патогенные микроорганизмы. Время выполнения исследования – 1-3 суток, в зависимости от загруженности лаборатории.

Видео по теме:

  • Embedded thumbnail
Любовь Добрецова

Врач-терапевт высшей категории. Стаж работы 12 лет.

Добавить комментарий